國產(chǎn)PCR儀購買時的注意事項

國產(chǎn)PCR儀購買時的注意事項

PCR儀作為分子生物學(xué)相關(guān)實驗的常規(guī)儀器，每年都有數(shù)千臺的選購量，這兩年一批國產(chǎn)PCR儀正在興起。購買國產(chǎn)PCR儀需要考慮以下因素
1樣本管的種類
現(xiàn)在主要有0.2ml和0.5ml兩種，使用0.5ml PCR管的人員已經(jīng)很少了，一是0.5ml PCR專用的薄壁管很少見，二是如果想要較大體積的PCR產(chǎn)物，可以通過多分幾個0.2ml PCR管來實現(xiàn)。除非經(jīng)常需要較大體積的PCR產(chǎn)物，否則可以不必考慮0.5ml型的PCR儀。
2 樣本容量
種類很多，0.2ml的有96孔和48孔，0.5ml的有60孔和30孔，384孔等，當然還有一些其他組合：如0.2ml的48孔與0.5ml的30孔組合。購買96孔的還是48孔的PCR儀主要從經(jīng)濟上考慮，當然現(xiàn)在很多的廠家都有雙48孔的產(chǎn)品，可以當兩臺48孔的PCR儀使用，也是一個比較好的選擇，但48孔的PCR儀大都沒有梯度功能。
 
一般來講384孔都是用384孔的，對封膜的要求比較高，一定要采用專門用于PCR反應(yīng)的膜，普通封板膜會影響PCR反應(yīng)，造成實驗失敗。還有一些特別的PCR儀，如用于原位PCR的。
3 溫度梯度功能
即不同列或不同行之間溫度可以為不同的溫度。這一功能對于固定PCR程序的檢驗人員來講，可能用處不大，但對于經(jīng)常進行不同基因擴增的研究人員來講可以說是必須的。因為大家都知道PCR反應(yīng)的復(fù)性溫度是PCR成功的要素，PCR復(fù)性溫度只有通過溫度梯度實驗來選擇才是適宜的，你可以通過溫度梯度實驗了解到實驗成功的復(fù)性溫度范圍，選擇中間的一個溫度點來保證實驗的可重復(fù)性。朗基T20、T30 PCR儀就屬于這一類。
 
通過理論計算得到的復(fù)性溫度可以作為溫度梯度實驗的中心點來使用，如果認為這一溫度就是好的復(fù)性溫度則是錯誤的。因為復(fù)性的溫度與緩沖液中的離子強度、DMSO的含量、Mg2+離子的濃度等都有直接關(guān)系，而研究人員一般并不了解所用的緩沖液中這些因素的含量或是在計算時都采用了缺省值。
 
另外，假設(shè)理論計算是正確的，但PCR儀的溫度還有準確性和精確性的問題，一般都在±0.3至±0.5，也會影響到實驗的重復(fù)性，通過實驗來確定復(fù)性溫度可以解決儀器準確性問題。這也是有些實驗在一臺儀器上做得很好，換一臺儀器就不好的一個原因。當然溫度梯度功能也可用于變性溫度等的優(yōu)化。
4計算控溫與模塊控溫
模塊控溫是早期PCR儀所使用的控溫方式，即所設(shè)定的溫度為加熱模塊的溫度，在變溫過程中，快要達到目標溫度時，PCR儀將升降溫速率降低，讓模塊的溫度慢慢接近目的溫度，而不發(fā)生過沖。
 
計算控溫也稱為管式控溫，即考慮的是PCR反應(yīng)管中的溫度，為了加快使反應(yīng)管中溫度達到目的溫度，模塊溫度先過沖，然后在反應(yīng)管中溫度接近達到目的溫度時調(diào)節(jié)到合適的溫度，調(diào)節(jié)方式是通過理論計算與實驗相結(jié)合而來的，與反應(yīng)管中的反應(yīng)液的體積有關(guān)，因此計算控溫模式都需要實驗人員輸入反應(yīng)液的體積。計算控溫模式已經(jīng)是普遍采用的方式了。
5 斷電保護功能
這也是一個很有用的功能，特別是在中小城市，經(jīng)常會發(fā)生短時間停電、保險絲融斷以及空氣開關(guān)跳閘等現(xiàn)象，如果沒有這一功能，開機后不能自動接下來進行實驗，往往會影響工作。
6熱蓋功能
熱蓋功能是各個廠家都有的，如果沒有，怕是沒人要了。熱蓋也分為可調(diào)式熱蓋和不可調(diào)式熱蓋。可調(diào)式熱蓋中又有力矩式可調(diào)熱蓋，主要解決在壓緊熱蓋時用力過大及過小的問題。
7. 軟件功能
儀器軟件功能方面當然都可以設(shè)置PCR程序了，只是方便不方便的問題，用熟了便方便了，差別都不大。只是有的顯示屏大些，可以畫出一個溫度變化曲線來，但大都是模擬的，意義也不大，只是好看些。還有如每個循環(huán)增減溫度以及增減時間的功能，好像多數(shù)儀器都有，如有這方面的需要則要注意一下。有些軟件有循環(huán)嵌套功能，在一些特殊實驗中也是用得上的。
 
8.使用壽命
儀器的使用壽命，如果不考慮維修的成本，則主要與半導(dǎo)體制冷片的壽命相關(guān)（由于其他變溫技術(shù)如壓縮機以及空氣加熱在普通PCR儀上已經(jīng)不多見了，因此在此不再多述），因為其他部件都可以維修，但半導(dǎo)體制冷片廠家是不維修的，也不允許更換。
 
PCR儀中這一關(guān)鍵部件的性能等廠家一般是不提供的。大家只能通過對半導(dǎo)體制冷片技術(shù)的了解以及對儀器使用時間及次數(shù)來了解了。變溫對于半導(dǎo)體制冷片是一個考驗，如果只是保溫，對半導(dǎo)體制冷片的影響是較小的，但對電源部分的影響較大。
9.電源可靠性
這是一個很重要的因素，但也是用戶有所忽視一個因素。因為絕大多數(shù)的儀器出現(xiàn)故障都是由于電源問題或是電源問題造成的。由于PCR儀是一個變溫儀器，也是一個使用時間長并且經(jīng)常連續(xù)使用的儀器，有些用戶一天使用達20小時左右。
 
電源出問題的原因是多方面的，一是潮氣和灰塵，在國內(nèi)，北方的灰塵很大，南方的潮氣很重。有時灰塵大到有些PCR儀打開后看不到電子元件了，電路板散熱不好，造成電源部分燒壞。有時潮氣大到儀器內(nèi)可以流出水來，造成電路板短路，電源部分燒壞。
 
另一個重要原因是電網(wǎng)中有較多的高壓脈沖群或電壓過高，進口的設(shè)備較少考慮這些問題，因此這些設(shè)備在國內(nèi)的故障率比在國外高很多。有些美國生產(chǎn)的儀器設(shè)計時考慮110V多些，雖然在220V的條件下也能正常運行，但長時間在240V左右運行則很容易出問題。
 
現(xiàn)在PCR儀所用的電源大多為開關(guān)電源，但也有用環(huán)形變壓器的，后者重量較大，對電網(wǎng)也有影響。開關(guān)電源最新的技術(shù)是整體開關(guān)電源，即整個電源封在一個筆記本電腦硬盤大小的盒子內(nèi)，可以防止潮氣和灰塵，通過一個大的散熱器和散熱風(fēng)扇來散熱，內(nèi)置過溫、過壓等保護功能，因此故障率很低，比較適合中國的國情。
 
10 維修成本與保修時間
這是一個很實際的問題，大多數(shù)PCR儀都只保修一年，有些在用戶的要求下會增加保修時間。一般儀器的保修費用為儀器價格的8-12%每年，所以保修也就是錢。一般來講進口儀器的維修成本會比較高，一是配件成本本身就高，二是運輸費用及進口關(guān)稅等。
 
另外進口儀器廠家一般都不允許進行原件級的維修，是出于利潤以及質(zhì)量兩方面的考慮，其實國外元件級維修的成本也許比更換電路板成本還高。因此只有國內(nèi)人員才進行元件級的維修，國內(nèi)人力成本低，水平也高些。
 
11 溫度的準確性與精確性
準確性與精確性都是有標準定義的，就PCR儀來講，準確性指的是設(shè)定溫度與實際溫度差別的大小，而精確性則是指不同孔間溫度的差別。一般來講，加熱模塊的中心溫度的準確性和精確性都要好些。
 
有些儀器廠家或代理商會將儀器的顯示精度作為儀器精確度指標，如將顯示精度0.1度說成精確度為0.1度。儀器顯示的溫度一般都是溫度傳感器所采集的數(shù)據(jù)在一小段時間內(nèi)的平均值，有些也是經(jīng)過處理的，如有些儀器在達到溫度后就一動不動或達到溫度前的數(shù)秒到十數(shù)秒內(nèi)顯示一個固定的溫度，然后突然顯示達到的溫度等。另外，溫度的準確性與精確性跟所選的溫度點有很大的關(guān)系，一般儀器都選在60度左右來注明，因為這也是實驗人員都關(guān)心的溫度點。
 
12 升降溫速率
這是很多的購買者很關(guān)心的問題，它可能會影響PCR反應(yīng)時間。但在這個問題上有些理解上的差別。一般儀器所標注都是MAX大升降溫速率，而用戶所理解的是溫度差與升降溫所用時間比值。這是有些用戶發(fā)現(xiàn)升降溫速率達不到儀器所標注的速率的原因。用戶所關(guān)心的是對用戶來講有意義的。
 
過度的升降溫速率對于用戶來講意義不大，因為容易引發(fā)溫度過沖，并需要較長時間來調(diào)整。使用過壓縮機型PCR儀的人可能會有這方面的經(jīng)驗。這也是為什么大家會發(fā)現(xiàn)升降溫速率很高的PCR儀其反應(yīng)時間與中等速率的PCR儀差別很小的一個原因。
13 其他因素
如噪音大小、外觀等也是需要考慮的。噪音就不必講了，當然是越小越好。外觀上各有所好，也不好評說，但在國內(nèi)還需要考慮的有是否顯臟。
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